Funkce každého filtru ve fluorescenčním mikroskopu
Nejkritičtějším problémem fluorescenční mikroskopie je kombinace optických filtrů. Jak excitační filtr, tak stínící filtr musí být vhodné pro pozorovaný fluorescenční materiál a musí být vzájemně sladěny. U některých specifických aplikací, pokud se vyskytnou chyby ve výběru filtrů, může to vést k nedorozuměním a dokonce k nesprávným výsledkům. Úspěchy technologie fluorescenční mikroskopie jsou neoddělitelné od vysoce-kvalitních filtrů a chytře přizpůsobených skupin filtrů. Existuje několik typů filtrů pro fluorescenční mikroskopii.
1. Filtr pohlcující teplo
Filtr absorbující teplo je nezbytným filtrem, který zabraňuje tepelnému záření ve spektru světelného zdroje poškozovat optický systém. Rané pokročilé mikroskopy byly vybaveny lahvemi ve tvaru bubnu, které mohly obsahovat destilovanou vodu jako zařízení pohlcující teplo. Moderní velké-výzkumné mikroskopy jsou vybaveny skleněnými filtry absorbujícími teplo ve světelných boxech světelných zdrojů nebo lampových komorách, což jsou průhledné a lehce žluté skleněné tabule. Filtry Leitz KG1 (2 mm) a BG38 (4 mm) dokážou propustit téměř všechna spektra ultrafialového a viditelného světla s mírou propustnosti světla až 98 %. Pouze selektivně absorbuje infračervené fototermální záření.
2. Budicí filtr
Excitační filtry mohou selektivně absorbovat spektrální čáry o dlouhých vlnových délkách a propouštět pouze ultrafialové světlo. Filtry fialového, modrého a zeleného světla jsou excitační filtry. Zeiss, Reichert, Olympus série B, G série, BG série, Shottova série UG, Opton série H, G, BP, Leitz série BP a další optické filtry jsou všechny excitační filtry.
3. Blokovací filtr
Blokovací filtr je filtr, který selektivně absorbuje krátkovlnné spektrální čáry a infračervené paprsky a zároveň umožňuje vidět delší vlny. Jeho funkcí je umožnit pozorovateli vidět fluorescenci vybuzenou kontrolovaným objektem a zároveň chránit rohovku pozorovatele před poškozením UV zářením.
4. Filtr pro separaci barev
Barevný separační filtr je zrcadlo filtru, které odráží excitační světlo na kontrolovaný objekt, což způsobuje, že objekt emituje fluorescenci, a poté fluorescenci přenáší do okuláru. Tento typ filtru lze použít pouze v kondenzátoru s dopadajícím světlem, zatímco fluorescenční mikroskop v procházejícím světle nevyžaduje separaci barev.
5. Interferenční filtr
Interferenční filtr je typ vysoce{0}}výkonného filtru buzení. Jedná se o filtr vyrobený naskládáním několika tenkých kovových filmů mezi dvě leštěné skleněné tabule. Index lomu každého tenkého kovového filmu je jiný, takže spektrální čáry různých vlnových délek osvětlovacího světelného zdroje se opakovaně odrážejí na každém kovovém filmu. Některé spektrální čáry určitých vlnových délek jsou zničeny destruktivní interferencí, zatímco jiné jsou zesíleny aditivní interferencí a procházejí skrz. Výsledkem je filtr s úzkým přenosovým spektrem a poloviční šířkou píku pouze 6-20nm. Propustnost může dosáhnout 60% -70%.
