Detekční metoda fluorescenční mikroskopie
fluorescenční mikroskop
Fluorescenční mikroskopie je základním nástrojem imunofluorescenční cytochemie. Skládá se z hlavních komponent, jako je světelný zdroj, systém filtračních desek a optický systém. Využívá určitou vlnovou délku světla k excitaci vzorku a emitování fluorescence, která je zvětšena přes systém objektivu a okuláru, aby se mohl pozorovat fluorescenční obraz vzorku (obrázek 1).
(1) Světelný zdroj
V dnešní době se jako zdroj světla běžně používá 200W ultra vysokotlaká rtuťová výbojka. Je vyroben z křemenného skla, uprostřed má kulovitý tvar a uvnitř je naplněno určité množství rtuti. Během provozu způsobí výboj mezi dvěma elektrodami odpařování rtuti a tlak uvnitř koule se rychle zvýší. Když se rtuť úplně odpaří, může dosáhnout 50-70 standardního atmosférického tlaku, což obecně trvá asi 5-15 minut. Luminiscence ultravysokotlakých rtuťových výbojek je výsledkem výboje mezi elektrodami, který nepřetržitě disociuje a redukuje molekuly rtuti a emituje fotony. Vyzařuje silné ultrafialové a modrofialové světlo, které stačí k excitaci různých fluorescenčních látek, proto je široce používán ve fluorescenčních mikroskopech.
Opatření pro použití fluorescenčního mikroskopu
(1) Přísně dodržujte pokyny továrny na fluorescenční mikroskopy a neměňte svévolně program.
(2) Kontrola by měla být prováděna v temné místnosti. Po vstupu do temné komory připojte napájení a zapalte ultra vysokotlakou rtuťovou výbojku po dobu 5-15 minut. Poté, co světelný zdroj vydá silné světlo a stabilizuje se, by se měly oči plně adaptovat na temnou komoru, než začnou preparát pozorovat.
(3) Aby se zabránilo poškození očí UV zářením, měli byste při nastavování zdroje světla nosit ochranné brýle.
(4) Doba kontroly by měla být pokaždé 1-2 hodin. Pokud překročí 90 minut, intenzita svítivosti ultravysokotlaké rtuťové výbojky se postupně snižuje a fluorescence slábne; Vzorky vystavené ultrafialovému záření po dobu 3-5 dnů
Po min se fluorescence také výrazně snížila; Maximální doba trvání by tedy neměla přesáhnout 2-3 hodin.
(5) Životnost zdroje světla fluorescenčního mikroskopu je omezená a vzorek by měl být centrálně vyšetřen, aby se ušetřil čas
Ušetřete čas a chraňte světelný zdroj. Když je horké počasí, měl by být přidán elektrický ventilátor, který odvede teplo a ochladí. Při výměně nové žárovky by se měla doba používání zaznamenat od začátku. Když je světlo zhasnuté a chcete jej znovu používat, musíte před zapálením počkat, až žárovka dostatečně vychladne. Vyhněte se osvětlení zdroje světla několikrát denně.
(6) Pozorujte vzorek ihned po obarvení, protože fluorescence bude časem postupně slábnout. Pokud je vzorek skladován v polyethylenovém plastovém sáčku při 4 stupních, může to zpozdit dobu zeslabení fluorescence a zabránit odpařování montážního prostředku.
(7) Kritéria posuzování pro jas fluorescence jsou obecně rozdělena do čtyř úrovní, konkrétně "jedna" - žádná nebo viditelná slabá fluorescence. "+" - Viditelná je pouze viditelná fluorescence. ++- Viditelné s jasnou fluorescencí. "+++" - Viditelná a oslnivá fluorescence.
