Experimentální principy metody přímého počítání v mikrobiální mikroskopii
Přímé počítání pod mikroskopem pomocí hemocytometru je běžně používanou metodou pro počítání mikroorganismů. Výhodou této metody je, že je intuitivní a rychlá. Vhodně naředěnou bakteriální suspenzi (nebo suspenzi spor) vložte do počítací komůrky mezi sklíčko a krycí sklíčko hemocytometru a spočítejte pod mikroskopem. Protože je objem počítací komůrky pevný (0.1 mm2), lze jej převést na celkový počet mikroorganismů na jednotku objemu na základě počtu mikroorganismů pozorovaných pod mikroskopem. Protože tato metoda počítá celkový počet živých a mrtvých bakterií, nazývá se také metoda celkového počtu bakterií.
Hemocytometr je obvykle speciální sklíčko se čtyřmi štěrbinami tvořícími tři platformy. Střední plošina je rozdělena na dvě poloviny krátkou horizontální drážkou. Na platformě je na každé straně vyrytá čtvercová mřížka. Každá čtvercová síť je rozdělena na devět velkých čtverců. Velké náměstí uprostřed je počítací místnost. Počítání mikroorganismů probíhá v počítací komoře. Struktura hemocytometru je znázorněna na obrázku Ⅷ-1.
Stupnice počítací komory má obecně dvě specifikace. Jeden je velký čtverec rozdělený na 16 středních čtverců a každý střední čtverec je rozdělen na 25 malých čtverců (obrázek Ⅷ-2); druhý je velký čtverec. Čtvercová síť je rozdělena na 25 středních čtverců a každý střední čtverec je rozdělen na 16 malých čtverců (obrázek VIII-1, C). Ale bez ohledu na to, o jaký druh počítací desky se jedná, počet malých čtverců v každém velkém čtverci je stejný, tj. 16×25=400 malých čtverců, jak je znázorněno na obrázku Ⅷ-2.
Délka strany každého velkého čtverce je 1 mm, takže plocha každého velkého čtverce je 1 mm2. Po zakrytí krycího skla je výška mezi podložním sklíčkem a krycím sklem 0,1 mm, takže objem počítací komory je 0,1 mm3.
Při počítání obvykle spočítejte celkový počet bakterií v pěti středních čtvercích, pak zjistěte průměrnou hodnotu každého středního čtverce a poté vynásobte 16 nebo 25, abyste získali celkový počet bakterií ve velkém čtverci, a poté vypočítejte Převést na celkový počet bakterií v 1ml bakteriálního roztoku.
