Posílení výhod laserové skenovací multifotonové mikroskopie
Laserová skenovací multifotonová mikroskopie je významným vylepšením oproti optické mikroskopii. Může pozorovat hlubokou strukturu živých buněk, fixovaných buněk a tkání a může získat jasné a ostré vícevrstvé struktury v rovině Z, tedy optické řezy, ze kterých může sestavit trojrozměrnou pevnou strukturu vzorku. Konfokální mikroskopie využívá zdroj laserového světla, který po expanzi vyplní celou zadní ohniskovou rovinu čočky objektivu a poté prochází čočkovým systémem čočky objektivu, aby se sblížil do velmi malého bodu v ohniskové rovině preparátu. V závislosti na numerické apertuře čočky objektivu je průměr nejjasnějšího bodu osvětlení asi 0,25 ~ 0,8μm a hloubka asi 0,5 ~ 1,5μm . Velikost konfokální skvrny závisí na konstrukci mikroskopu, vlnové délce laseru, vlastnostech čočky objektivu, nastavení stavu skenovací jednotky a vlastnostech vzorku. Mikroskopie pole má velký rozsah a hloubku osvětlení, zatímco konfokální mikroskopie má zaostřené osvětlení zaměřené na ohnisko v ohniskové rovině. Nejzákladnější výhodou konfokální mikroskopie je to, že může provádět jemné optické řezání silných fluorescenčních vzorků (které mohou dosáhnout 50 μm nebo více) a tloušťka řezů je asi 0,5 až 1,5 μm. Sérii obrazů optických řezů lze získat pohybem preparátu nahoru a dolů pomocí krokového motoru v ose Z mikroskopu. Získávání obrazových informací je řízeno v rovině a nebude rušeno signály vysílanými z jiných míst na vzorku. Po odstranění vlivu fluorescence pozadí a zvýšení poměru signálu k šumu se kontrast a rozlišení konfokálních snímků výrazně zlepší ve srovnání s tradičními fluorescenčními snímky s osvětlením pole. V mnoha exemplářích je mnoho složitých konstrukčních komponent propleteno a tvoří složité systémy, ale jakmile se podaří shromáždit dostatek optických řezů, můžeme je pomocí softwaru rekonstruovat ve třech rozměrech. Tato experimentální metoda byla široce používána v biologickém výzkumu k objasnění složitých strukturních a funkčních vztahů mezi buňkami nebo tkáněmi.
