Rozdíl mezi fluorescenčním mikroskopem a laserovým konfokálním mikroskopem
fluorescenční mikroskop
1. Fluorescenční mikroskop používá jako zdroj světla ultrafialové světlo, které se používá k ozařování detekovaného objektu, aby emitoval fluorescenci, a pak pozoruje tvar a polohu objektu pod mikroskopem. Fluorescenční mikroskop se používá ke studiu absorpce, transportu, distribuce a umístění chemických látek v buňkách. Některé látky v buňkách, jako je chlorofyl, mohou po ozáření ultrafialovými paprsky fluoreskovat; Jiné látky nemohou samy fluoreskovat, ale mohou fluoreskovat po obarvení fluorescenčními barvivy nebo fluorescenčními protilátkami a ozáření ultrafialovými paprsky. Fluorescenční mikroskop je jedním z nástrojů pro kvalitativní i kvantitativní výzkum těchto látek.
2, princip fluorescenčního mikroskopu:
(a) Světelný zdroj: Světelný zdroj vyzařuje světlo různých vlnových délek (od ultrafialového po infračervené).
(b) Světelný zdroj s excitačním filtrem: přenáší světlo se specifickou vlnovou délkou, která může způsobit fluorescenci vzorku, zatímco blokuje světlo, které je pro excitační fluorescenci nepoužitelné.
(c) Fluorescenční vzorky: obecně obarvené fluorescenčními pigmenty.
(d) Blokovací filtr: blokující excitační světlo neabsorbované vzorkem za účelem selektivního přenosu fluorescence a některé vlnové délky ve fluorescenci jsou také selektivně přenášeny. Mikroskop, který využívá ultrafialové světlo jako zdroj světla k tomu, aby ozařovaný objekt emitoval fluorescenci. Elektronový mikroskop poprvé sestavili Knohl a Ha Roska v Berlíně v roce 1931. Tento mikroskop využívá vysokorychlostní elektronový paprsek místo světelného paprsku. Vzhledem k tomu, že vlnová délka toku elektronů je mnohem kratší než vlnová délka světelné vlny, může zvětšení elektronového mikroskopu dosáhnout 800 tisíckrát a minimální limit rozlišení je 0,2 nanometru. Rastrovací elektronový mikroskop, který se začal používat v roce 1963, dokáže lidem přimět vidět drobné struktury na povrchu předmětů.
3. Rozsah použití: používá se ke zvětšení obrazu drobných předmětů. Obecně se používá pro pozorování biologie, medicíny a mikroskopických částic.
Konfokální mikroskop
1. Konfokální mikroskop přidává na optickou dráhu odraženého světla semireflexní poločočku, která láme odražené světlo, které prošlo čočkou, do jiných směrů. V jeho ohnisku je ozvučnice s dírkou a dírka je umístěna u ohniska. Za ozvučnicí je trubice fotonásobiče. Lze si představit, že odražené světlo před a po ohnisku detekčního světla prochází tímto konfokálním systémem a nebude zaměřeno na malý otvor, ale bude blokováno přepážkou. Fotometr tedy měří intenzitu odraženého světla v ohnisku.
2. Princip: Tradiční optický mikroskop využívá zdroj polního světla a obraz každého bodu na preparátu bude rušen difrakcí nebo rozptýleným světlem sousedních bodů; Laserový skenovací konfokální mikroskop snímá každý bod ohniskové roviny ve vzorku pomocí bodového zdroje světla tvořeného laserovým paprskem procházejícím osvětlovací dírkou. Ozářený bod na vzorku je zobrazen v detekční dírce, která je po detekci dírky přijímána bod po bodu nebo řádek po bodu pomocí fotonásobiče (PMT) nebo zařízení s vazbou za studena (cCCD), a na něm se rychle vytvoří fluorescenční obraz. obrazovce monitoru počítače. Osvětlovací dírka a detekční dírka jsou sdružené s ohledem na ohniskovou rovinu čočky objektivu a body na ohniskové rovině se zaměřují na osvětlovací dírku a emisní dírku současně a body mimo ohniskovou rovinu nebudou být zobrazen v detekčním otvoru, takže získaný konfokální obraz je optickým průřezem vzorku, který překonává vadu rozmazaného obrazu běžného mikroskopu.
3. Oblasti použití: zahrnující medicínu, výzkum zvířat a rostlin, biochemii, bakteriologii, buněčnou biologii, tkáň a embryo, potravinářství, genetiku, farmakologii, fyziologii, optiku, patologii, botaniku, neurovědu, mořská biologie, nauku o materiálech, elektronickou vědu, mechanika, ropná geologie a mineralogie.
