Podrobně popište kroky a metody výběru fluorescenčních sond pro konfokální mikroskopii
Při experimentech s konfokálními mikroskopy lze některé experimentální indikátory detekovat pomocí autofluorescence samotného vzorku nebo exogenních látek, ale většina testovaných látek nemá měřitelnou fluorescenci a je třeba je značit fluorescenčními sondami. Má měřitelný fluorescenční signál. Jak tedy vybrat fluorescenční sondy pro konfokální mikroskopii?
1. Určete indikátory, které mají být testovány, podle účelu experimentu
Jakmile je stanoven detekční index, je také určen rozsah výběru fluorescenčních sond. Je vidět, že výběr, kterou fluorescenční sondu použít v experimentu, je dán účelem experimentu. Pokud je například účelem experimentu studovat změny iontů vápníku v kardiomyocytech při výskytu fibrilace síní, lze určit, že testovanou látkou jsou ionty vápníku v kardiomyocytech a rozsah výběru fluorescenčních sond je omezen na sondy vápenatých iontů, které mohou označovat živé buňky. Jehla.
2. Určete rozsah dostupných fluorescenčních sond
U nových experimentálních látek nebo indikátorů, pokud účelem experimentu není prozkoumat nové fluorescenční sondy, můžete zvolit použití zralých sond a metod značení. Typ nebo rozsah fluorescenčních sond, které mohou označovat testovanou látku, lze určit prohledáním autoritativní literatury nebo produktových katalogů známých reagencií doma i v zahraničí.
3. Zjistěte, zda vlastnosti fluorescenční sondy splňují požadavky na přípravu fluorescenčních vzorků
Charakteristiky fluorescenčních sond přímo ovlivňují značení vzorků a výsledky experimentů. Proto před výběrem fluorescenčních sond a značení vzorků v experimentu je nutné plně porozumět jejich fluorescenčním charakteristikám. Charakteristiky fluorescenčních sond, které mají být zkoumány, zahrnují:
1. Reakční charakteristiky světelných sond a vzorků
2. Citlivost a intenzita fluorescence fluorescenčních sond
3. Spektrální vlastnosti vzorků značených fluorescenčními sondami
4. Stabilita fluorescence
5. Interakce mezi vícenásobnou fluorescencí ve vzorku
