Metody ladění a kroky pro mikroskopii s fázovým kontrastem
A. Na základě nastavení systému osvětlení Kuhler použijte metodu světlého pole pro jasné zaostření vzorku;
b. Otočte reflektor na Ph1 a vyrovnejte jej s ryskou na otočném talíři. Vyberte objektiv s 10x fázovým kontrastem a nahraďte jej průhledným vzorkem, který chcete pozorovat;
C. Odstraňte jeden z okulárů, nahraďte jej centrovacím dalekohledem a zaostřete na dva kontrastní kroužky v zorném poli (černý kontrastní kroužek čočky objektivu a propustný kontrastní kroužek kondenzorové čočky);
d. Dva rozdílové kroužky v zorném poli se nemusí nutně shodovat. Seřiďte dvě nastavovací zařízení na reflektoru (nastavení levé a pravé polohy rozdílových kroužků pomocí nastavovacích tyčí a knoflíků typu třecího typu pro nastavení přední a zadní polohy), aby se průhledný kroužek pohyboval dopředu a dozadu, aby se shodoval s černým kroužkem ;
E. Po nastavení přepněte zpět na pozorovací okulár a zatlačte zelený filtr do optické dráhy, abyste mohli pozorovat obraz fázového rozdílu vzorku;
F. Při pozorování s čočkami objektivu 20 x a 40 x by měl být reflektor nastaven do polohy Ph2 a při použití čočky objektivu 100 x by měl být reflektor nastaven do polohy Ph3.
Rozsah použití: Vhodné pro pozorování průhledných, nebarvených nebo nebarvených vzorků, jako jsou různé buňky, živé tkáně, nebarvené nebo nebarvené řezy tkání, vodní organismy atd.
Základní princip fázového kontrastního mikroskopu
Když světlo prochází relativně průhledným vzorkem, nedochází k žádné významné změně vlnové délky (barvy) a amplitudy (jasu) světla. Proto při pozorování neobarvených vzorků (jako jsou živé buňky) pod běžným optickým mikroskopem je často obtížné rozlišit jejich morfologii a vnitřní strukturu. Vzhledem k rozdílům v indexu lomu a tloušťce různých částí buňky však budou rozdíly v optické dráze přímého a odraženého světla při průchodu tímto vzorkem. Jak se optická dráha zvětšuje nebo zmenšuje, fáze zrychlování nebo zpožďování světelných vln se bude měnit (což má za následek fázový rozdíl). Fázový rozdíl světla není pouhým okem cítit, ale mikroskop fázového rozdílu může využít své speciální zařízení - kruhovou aperturu a fázovou desku a využít interferenční jev světla k přeměně fázového rozdílu světla na rozdíl amplitud. (rozdíl světla a tmy), které lze detekovat lidským okem. To způsobuje, že původně průhledný objekt vykazuje zjevné rozdíly ve světle a tmě, zvyšuje kontrast a umožňuje nám jasně pozorovat živé buňky a určité jemné struktury uvnitř buněk, které nelze vidět nebo jasně vidět pod běžnými optickými mikroskopy a mikroskopy v tmavém poli.
Princip zobrazování mikroskopu s fázovým kontrastem: Optický zdroj může procházet pouze průhledným prstencem kruhové apertury, která je pak zaostřena do paprsku světla. Když tento paprsek světla prochází testovaným objektem, podstupuje různé stupně odchylky (difrakce) v důsledku různých optických drah každé části. Vzhledem k tomu, že obraz tvořený průhledným prstencem se shoduje s konjugovanou plochou na fázové desce a ohniskovou rovinou za čočkou objektivu. Proto přímé světlo, které se neodchýlilo, prochází konjugovaným povrchem, zatímco ohybové světlo, které se odchýlilo, prochází kompenzačním povrchem. Vzhledem k různým vlastnostem konjugovaného povrchu a kompenzačního povrchu na fázové desce budou generovat určitý fázový rozdíl a snížení intenzity světla procházejícího těmito dvěma částmi. Tyto dvě sady světla se pak budou sbíhat přes zadní čočku a cestovat po stejné optické dráze, což způsobí interferenci mezi přímým a difraktovaným světlem a změní fázový rozdíl na rozdíl amplitud. Tímto způsobem se během mikroskopie s fázovým kontrastem fázový rozdíl, který nelze lidským okem rozlišit, převádí na rozdíl amplitud (rozdíl jasu), který může lidské oko rozlišit prostřednictvím světla bezbarvého průhledného tělesa.
