Srovnání konfokálního mikroskopu a běžného optického mikroskopu
Mikroskop je hlavním nástrojem pro pozorování buněk. V závislosti na světelném zdroji jej lze rozdělit do dvou kategorií: optický mikroskop a elektronový mikroskop. První používá jako zdroj světla viditelné světlo (od ultrafialového mikroskopu až po ultrafialové světlo), zatímco druhý používá jako zdroj světla elektronový paprsek. Běžný optický mikroskop a laserový konfokální mikroskop patří ke stejnému optickému mikroskopu.
I. Obecný optický mikroskop
Běžný biologický mikroskop se skládá ze tří částí, a to: ① osvětlovací systém včetně světelného zdroje a kondenzoru; ② optický zvětšovací systém, skládající se z objektivů a okulárů, je hlavním tělem mikroskopu, aby se eliminovala sférická a chromatická aberace, okuláry a objektivy se skládají z komplexní skupiny čoček; ③ mechanické zařízení, které se používá k upevnění materiálu a sledování pohodlí.
Objekt mikroskopu je jasný nejen určen zvětšením, ale také rozlišovací schopností mikroskopu (rozlišení), rozlišovací schopnost se vztahuje na mikroskop (nebo lidské oko od cíle 25 cm) dokáže rozlišit objekt v malých intervalech schopnosti rozlišit velikost rozlišovací schopnosti je určena vlnovou délkou světla a rychlostí zrcadlení a indexem lomu prostředí, vyjádřeno vzorcem:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 kde: n=index lomu média;=úhel ústí zrcadla (vzorek na ústí čočky objektivu úhlu napětí), NA=míra ústí zrcadla (numerická apertura). Úhel ústí zrcadla má být vždy menší než 180?, takže hodnota zui sina/2 je nutně menší než 1.
Index lomu skla používaného při výrobě optických čoček je 1,65 ~ 1,78, index lomu použitého média čím blíže ke sklu, tím lépe. Pro suchou čočku objektivu, médium pro vzduch, je rychlost zrcadlení obecně 0.05 ~ 0,95; olejová čočka s cedrovým olejem jako médium, míra zrcadlového úst může být blízko 1,5.
Vlnová délka běžného světla 400~700nm, takže hodnota rozlišovací schopnosti mikroskopu nebude menší než 0,2μm, rozlišovací schopnost lidského oka je 0,2mm, takže obecný design mikroskopu zui zvětšení je obvykle 1000X.
Za druhé, laserový konfokální skenovací mikroskop
Laserový konfokální rastrovací mikroskop (laserový konfokální rastrovací mikroskop), s laserem jako skenovacím světelným zdrojem, bod po bodu, řádek po řádku, povrch po povrchu rychlé skenování, skenovací laser a fluorescenční sběr společného objektivu, objektivový skenovací laserový zaostřovací bod , ale také okamžité zobrazení bodu objektu. Díky kratší vlnové délce laserového paprsku je paprsek velmi jemný, proto má konfokální laserový rastrovací mikroskop vysoké rozlišení, asi 3x větší než běžný optický mikroskop. Systém je zaostřen jednou a skenování je omezeno na jednu rovinu vzorku. Když hloubka zaostření není stejná, lze získat obrazy různých úrovní hloubky vzorku a tyto obrazové informace jsou uloženy v počítači, pomocí počítačové analýzy a simulace mohou ukázat trojrozměrnou strukturu vzorku buňky. .
