Biomikroskopie týkající se objemu tkáňových bloků
Biologická mikroskopie Doposud jsou fixace za studena, zmrazené ultratenké řezy a lyofilizace rutinními metodami pro tkáňové a buněčné rentgenové mikrořezy. Podrobnosti této metody jsou vysvětleny následovně:
U biologických mikroskopů s kondenzorem lze kondenzorem posouvat nahoru a dolů, aby byla jasnost mírná, a clonu proměnného světla lze také měnit tak, aby bylo dosaženo střední jasnosti 9b. Pokud je světlo slunečné, lze kondenzor přiměřeně zvednout a aperturu proměnného světelného zdroje vhodně zvětšit. Je-li světlo příliš silné, lze kondenzorovou čočku přiměřeně sklopit a přiměřeně snížit clonu protínajícího se světla. Pokud se i v tomto případě cítíte oslnění, můžete si vybrat vhodný filtr a umístit jej na držák pod kondenzátorem. Tento dub bude schopen získat jas, který vás uspokojí. Nastavení horní a dolní polohy kondenzoru, nastavení velikosti apertury proměnného optického čtení a výběr vhodného filtru samozřejmě vyžaduje určitou dobu praxe pro získání zkušeností.
Velmi důležitým problémem v biologické mikroskopii je, že v procesu odběru vzorků a separace buněk, po lyofilizaci a zalití pryskyřicí (FD), po zmrazení ultratenkých agregátů a po lyofilizaci, obsah 65 prvků v každé části musí být zacházeno opatrně. Buňky, které mají být analyzovány, nemohou být poškozeny. Protože rentgenová mikroanalýza nejenže zahrnuje mnoho kroků, ale také hodně stojí. Pokud jsou analyzovanými buňkami poškozené buňky nebo mrtvé buňky po dlouhé době a vícestupňovém zpracování, je velmi politováníhodné dělat nesprávné závěry. Například kardiomyocyty oddělené působením kolagenázy mají dvě formy, jedna je dlouhá tyčinka
Biomikroskopie Množství a distribuce elektrolytů v těchto dvou typech článků jsou zcela odlišné. Na je velmi vysoká a K je velmi nízká v cirkulárních kardiomyocytech a koncentrace ca v nematodách je velmi vysoká. Po kontrole jinými analytickými metodami bylo prokázáno, že vysoké Na a nízké K kulatých buněk a vysoké Ca v mitochondriích jsou způsobeny poškozením buněčné membrány během procesu buněčné separace. Ledově chladná fixační metoda buněk a tkání je obvykle nejprve přijmout kalení a fixaci a poté je uložit do kapalného dusíku. Pro efekt konzervace je velmi důležitá zhášecí fixace. Živé buňky nebo čerstvé tkáně jsou bohaté na vodu. Při kalení se části buněk nebo tkání, které jsou v přímém kontaktu s drceným chladivem (zejména při kalení kapalným dusíkem), často nejprve zmrazí a zafixují, čímž se vytvoří „skořápka“, která brání Centrální části buněk byly drcené a za studena fixované. Proto se při provádění mikrooblastní analýzy X-line často zjistí, že ve středu větších buněk jsou ledové krystaly. Aby se tomu zabránilo, používá se jako rozbité chladivo látka s bodem tání vyšším než má kapalný dusík, ale nižším než má 806c. Takových látek je mnoho, ale nejsnáze se dají sehnat, nejlevnější je koncentrovaný propan (bod varu - 42.120c, bod tání - 187.10c, molekulová hmotnost 44,1) a rychlost chlazení je nejrychlejší . Jeho nevýhodou ale je, že je hořlavý.
Biologický mikroskop umí dát svalové vlákno na speciální stojan, takže když kontrakce svalového vlákna dosáhne určité fáze a je třeba jej zafixovat, okamžitě spusťte trysku, aby na svalové vlákno rozstřikovala tekutý propan, aby se uhasilo a zafixovalo. Poté byla svalová vlákna spolu s rámem vyjmuta a vložena do tekutého dusíku. Pokud fixujete krvinky nebo izolované buňky, nejprve je koncentrujte centrifugací při nízké rychlosti, přeneste je do stříbrné lahvičky s dobrou tepelnou vodivostí, vložte lahvičku do kapalného propanu a zmrazte pro fixaci. Při fixaci krysí slinivky v Hallově laboratoři byly dva ocelové bloky předem ochlazeny kapalným heliem (nebo tekutým dusíkem) a dva měděné bloky byly sevřeny kleštěmi a umístěny na přední a zadní stranu slinivky, aby se uhasily a fixovaly. slinivka břišní. Tkáně nebo buňky mohou být skladovány v kapalném dusíku pro dlouhodobé skladování po kalení a fixaci.
Biologická mikroskopie Kromě aktuálně nejuznávanější metody zmrazených ultratenkých řezů je zde další technika depozice, kterou vědci používají. Přidá se látka za účelem vytvoření sedimentu se složkou, která má být analyzována, aby se před analýzou imobilizovala, a sediment se pak analyzuje. Například lidé často používají oxalát a pyroantimonát k ukládání vápníku ve svalových buňkách. První z nich není dostatečně citlivý na nízkou koncentraci Ca v cytoplazmě; pyroantimonát je citlivější a může tvořit elektronově husté depozita s volným Ca v mozku, ale pyroantimonát není kompatibilní se sodíkem, manganem, bariem, železem Depozita se také tvoří a jsou méně specifické. Proces přípravy vzorku je podobný přípravě vzorků ultratenkých řezů z běžného transmisního elektronového mikroskopu, rozdíl je v tom, že 3 procenta pyroantimoničnanu draselného (fyziologický roztok s fosfátovým pufrem, pH 7,6) byla fixována po dobu 6 hodin před fixací a na obarvených ultratenkých řezech svalu, Ve středních liniích pásů A a 2 každé sarkomery byly vidět černé usazeniny a nebarvené řezy byly použity pro rentgenovou mikroanalýzu. Diaminobenzidin tetrahydrochlorid (DAB) byl použit k vysrážení látek obsahujících hem a tak dále. Kombinaci histochemické precipitační reakce a rentgenového mikrodiferenciačního můstku lze uvažovat v laboratořích, které nemají podmínky zmrazeného ultratenkého řezu. Semikvantitativní lze provést podle výšky píku prvků, které mají být analyzovány
