Biologický mikroskop týkající se objemu tkáňových bloků
Biologická mikroskopie Dosud jsou fixace za studena, zmrazené ultratenké řezy a lyofilizace rutinními metodami pro rentgenové mikrořezy tkání a buněk. Níže jsou uvedeny podrobnosti této metody:
Biologické mikroskopy. U mikroskopů s kondenzorem lze kondenzorem posouvat nahoru a dolů pro dosažení střední jasnosti. Kromě toho lze clonu proměnných světelných diod změnit tak, aby bylo dosaženo mírného jasu 9b. Pokud je světlo jasné, lze kondenzor přiměřeně zvednout a aperturu proměnného světla vhodně zvětšit. Je-li světlo příliš silné, lze kondenzor vhodně snížit a clonu příčného světelného paprsku vhodně zmenšit. Pokud se v této situaci stále cítíte oslnění, můžete si vybrat vhodný filtr a umístit jej na držák pod kondenzátorem. Tímto způsobem můžete získat jas, který vám vyhovuje. Samozřejmě to vyžaduje určitou dobu praxe, než získáte zkušenosti s nastavením horní a dolní polohy kondenzoru pro dosažení variabilní velikosti apertury a výběrem vhodných filtrů.
Velmi důležitým problémem v biologické mikroskopii je, že během procesu shromažďování a separace buněk, po lyofilizaci a zalití pryskyřicí (FD), po zmrazení ultratenkých pelet a po lyofilizaci musí obsah 65 prvků v každé části být analyzován velmi pečlivě a absolutně Nepoškozujte analyzované buňky. Protože rentgenová mikrooblastní analýza zahrnuje nejen mnoho kroků, ale také hodně stojí. Pokud jsou po dlouhé době a několika krocích analyzované buňky poškozené nebo mrtvé, byla by škoda vyvozovat nesprávné závěry. Například kardiomyocyty izolované po ošetření kolagenázou mají dva tvary, jeden je ve tvaru dlouhé tyčinky a druhý je kulatý. Posledně jmenované jsou odumírající buňky, které jsou poškozeny během buněčné izolace.
Biologická mikroskopie Obsah a distribuce elektrolytů v těchto dvou typech článků jsou velmi odlišné. Na je velmi vysoká a K je velmi nízká v kulatých kardiomyocytech a koncentrace Ca v lineárních větvích je velmi vysoká. Po kontrole jinými analytickými metodami bylo prokázáno, že vysoké Na a nízké K v kulatých buňkách a vysoké ca v mitochondriích byly způsobeny poškozením buněčné membrány během procesu buněčné separace. Metoda fixace buněk a tkání za studena často spočívá v jejich nejprve zchlazení a fixaci a následném uložení v kapalném dusíku. Pro konzervační účinek je velmi důležité kalení a fixace. Živé buňky nebo čerstvé tkáně jsou bohaté na vodu. Při zhášení jsou části buněk nebo tkání, které jsou v přímém kontaktu s kryogenem (zejména při zhášení kapalným dusíkem), nejprve zmrazeny a fixovány, čímž se vytvoří „skořápka“, která brání rozdrcení Centrální část buněk byla rozdrcena a za studena fixované. Proto se při provádění mikrooblastní analýzy X-line často zjistí, že ve středu větších buněk jsou ledové krystaly. Aby se tomu zabránilo, používá se jako drcené chladivo látka s vyšším bodem tání než kapalný dusík, ale nižší sušinou -806c. Takových látek je mnoho, ale nejjednodušší a nejlevnější je koncentrovaný propan (bod varu - 42.120c, bod tání - 187.10c, molekulová hmotnost 44,1) a rychlost chlazení je také nejrychlejší. Jeho nevýhodou ale je, že je hořlavý.
Biologický mikroskop umí dát svalové vlákno na speciální rám. Když kontrakce svalového vlákna dosáhne určité fáze a je třeba ji zafixovat, tryska se okamžitě spustí, aby na svalové vlákno nastříkala tekutý propan, aby je uhasila a zafixovala. Poté byla svalová vlákna spolu s rámem vyjmuta a vložena do tekutého dusíku. Pokud jsou krvinky nebo separované buňky fixovány, nejprve centrifugujte při nízké rychlosti, aby se buňky zkoncentrovaly, přeneste buňky do malé stříbrné zkumavky s dobrou tepelnou vodivostí, vložte zkumavku do kapalného propanu a zmrazte, aby se zafixovala. Při fixaci krysí slinivky v Hallově laboratoři nejprve předchlaďte dva ocelové bloky kapalným heliem (nebo tekutým dusíkem), upněte dva měděné bloky kleštěmi a umístěte je před a za slinivku, aby se uhasila a fixovala děložní žláza. . Tkáně nebo buňky mohou být zhášeny a fixovány a poté přeneseny do kapalného dusíku pro dlouhodobé skladování.
