Základní struktura konfokální fluorescenční mikroskopie
(1) Skenovací modul
Skenovací modul se skládá hlavně z dírkové světelné lišty (řídící tloušťku optických plátků), spektroskopu (měnící směr šíření světla podle vlnové délky), emisního fluorescenčního kolorimetru (výběr světla v určitém rozsahu vlnových délek pro detekci) a detektor (elektronka fotonásobiče). Smíšená fluorescence ve fluorescenčním vzorku vstupuje do skeneru a poté, co je vybrána detekční světelnou lištou, spektrometrem a kolorimetrem, je rozdělena na různé monochromatické fluorescence, které jsou detekovány v různých fluorescenčních kanálech a tvoří odpovídající konfokální obrazy. Současně lze na obrazovce počítače zobrazit několik paralelních monochromatických fluorescenčních snímků a jejich složených snímků.
(2) Systém fluorescenční mikroskopie
Mikroskop je hlavní součástí LSCM, která souvisí s kvalitou zobrazení systému. Optická dráha mikroskopu může být snadno vložena do nekonečně vzdáleného optického systému s optickými možnostmi bez ovlivnění kvality zobrazení a přesnosti měření. Objektiv by měl být apochromatický objektiv s plochou obrazovkou s velkou numerickou aperturou, který je výhodný pro získávání fluorescence a jasné zobrazování. Převod skupiny čoček objektivu, výběr skupiny barevných filtrů, nastavení pohybu stolku a zablokování ohniskové roviny paměti, to vše by mělo být automaticky řízeno počítačem.
Fluorescenční mikroskop používaný v laserové skenovací konfokální mikroskopii je obecně stejný jako běžný fluorescenční mikroskop, ale má své vlastní vlastnosti: musí být připojen ke skeneru, aby laser mohl vstoupit do objektivu mikroskopu, aby ozářil vzorek a vytvořil fluorescence emitovaná vzorkem dosáhne detektoru; Je zapotřebí zařízení pro přeměnu světelné dráhy, které převádí rtuťové výbojky na lasery, a lze nastavit intenzitu světla rtuťové výbojky.
(3) Běžné lasery
Laserové zdroje používané v laserové skenovací konfokální mikroskopii zahrnují jednoduché laserové a více laserové systémy a běžně používané lasery zahrnují následující tři typy:
Polovodičový laser: 405nm (blízko ultrafialové spektrální čáry)
Argonový iontový laser: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (modré zelené světlo)
He-Ne laser: 543nm (zelené světlo He-Ne zelený laser) 633nm (červené světlo He-Ne červený laser)
UV laser (UV laser): 351 nm, 364 nm (UV světlo)
(4) Pomocná zařízení
Vzduchem chlazené, vodou chlazené chladicí systémy a regulované napájecí zdroje.
Základním pracovním principem laserového skenovacího konfokálního mikroskopu je nejprve emitovat z laseru určitou vlnovou délku excitačního světla. Po zesílení světlo prochází osvětlenou dírkovou světelnou lištou ve skeneru a tvoří bodový zdroj světla. Čočka objektivu se zaměřuje na ohniskovou rovinu vzorku a odpovídající osvětlené body na vzorku jsou excitovány a emitují fluorescenci. Po průchodu světelnou lištou detekčního otvoru se dostane k detektoru a zobrazí se na monitorovací obrazovce počítače. Tímto způsobem je vytvořen úplný konfokální obraz fluorescenčními obrazy každého bodu vzorku v ohniskové rovině, který se nazývá světelný řez.
