Základní principy konfokálních laserových mikroskopů
Jádro konfokální laserové mikroskopie spočívá v "konfokální" technologii. Tato technologie využívá bodový zdroj světla (obvykle laser) a speciální optický systém, takže během procesu zobrazování je osvětlen a zobrazen pouze vzorek v ohnisku, zatímco oblasti mimo ohnisko jsou ignorovány. Tato metoda selektivního osvětlení a detekce výrazně zlepšuje rozlišení a kontrast zobrazení.
1. Světelný zdroj
Konfokální mikroskopy používají lasery jako zdroje světla, protože lasery mají vysokou monochromatičnost, koherenci a směrovost. Tyto vlastnosti umožňují laserům poskytovat stabilní osvětlení a přesné řízení zaostřování paprsku.
2. Systém osvětlení
Součástí osvětlovacího systému je laser a skenovací zařízení. Laserový paprsek se rychle pohybuje skrz skenovací zařízení (obvykle galvanometr), aby bylo dosaženo bodového skenování vzorku. Tato skenovací metoda umožňuje laserovému paprsku vytvořit řadu ohniskových bodů na vzorku, čímž se dosáhne zobrazení vzorku vrstva po vrstvě.
3. Konfokální clona
Mezi čočkou objektivu mikroskopu a vzorkem je konfokální otvor. Funkcí této clony je omezit hloubku zobrazení a pouze světlo procházející touto clonou může být přijímáno detektorem. Tímto způsobem může do detektoru vstupovat pouze světlo v ohnisku, zatímco světlo mimo ohnisko je blokováno.
4. Objektiv
Čočka objektivu je klíčovou součástí konfokální mikroskopie, která je zodpovědná za zaostření laseru na vzorek a sběr světla odraženého nebo emitovaného zpět ze vzorku. Vysoce kvalitní čočky objektivů mohou poskytovat-zobrazení s vysokým rozlišením.
5. Detektor
Detektor je zodpovědný za příjem světla procházejícího konfokální aperturou a jeho přeměnu na elektrický signál. Tyto elektrické signály jsou pak zpracovány za účelem generování obrázků.
6. Zpracování obrazu
Nezpracovaná data generovaná konfokální mikroskopií jsou série dvou-rozměrných snímků, které je třeba zpracovat počítačovým softwarem, aby bylo možné rekonstruovat trojrozměrné{1}}obrazy. Tento proces zahrnuje překrývání obrazu, vylepšení a 3D rekonstrukci.
